Résumé

CO-024

Apport de la LC-MS/MS dans l’exploration de la voie minéralocorticoïde

S. Travers*^a (M.), L. Martinerie^a (Dr), P. Boileau^b (Pr), M. Lombès^c (Dr), E. Pussard^d (Dr)

^a UMR S 1185, Université Paris Sud, Le Kremlin-Bicêtre, FRANCE ; ^b Réanimation Néonatale, CH Poissy Saint-Germain-en-Laye, Poissy, FRANCE ; ^c UMR S 1185, Université Paris Sud ; Service d’Endocrinologie et des Maladies de la Reproduction, Hôpitaux Universitaires Paris Sud, Le Kremlin-Bicêtre, FRANCE ; ^d UMR S 1185, Université Paris Sud ; Service de Génétique Moléculaire , Pharmacogénétique, Hormonologie, Hôpitaux Universitaires Paris Sud, Le Kremlin-Bicêtre, FRANCE

* simon.travers@ymail.com

L’exploration de la voie minéralocorticoïde repose actuellement sur des méthodes radio-immunologiques de faible spécificité, se limitant essentiellement au dosage de l’aldostérone sans explorer l’ensemble des intermédiaires de synthèse. Nous avons développé une méthode sensible permettant l’étude complète et simultanée des voies minéralo- et gluco-corticoïdes, facilitant notamment l’investigation hormonale chez le nouveau-né à terme et le prématuré.

Douze stéroïdes plasmatiques ont été purifiés par extraction solide/liquide puis quantifiés par une méthode UPLC couplée à un spectromètre de masse en tandem (Xevo-TQS Waters). Cette méthode a été appliquée à l’évaluation des voies de synthèse chez des enfants présentant des blocs enzymatiques et les nouveaux-nés de la cohorte PREMALDO (PHRC national).

La méthode permet la quantification simultanée des minéralocorticoïdes (corticostérone, déoxycorticostérone, 18-hydroxycorticostérone et aldostérone, ainsi que 18-hydroxydéoxycorticostérone et 11-oxocorticostérone), des glucocorticoïdes (17-hydroxyprogesterone, 11-deoxycortisol, cortisol, cortisone) mais aussi progestérone et androstènedione. La méthode est reproductible (CV < 10%) et linéaire pour tous les stéroïdes. Sa forte sensibilité (aldostérone : 20 pg/mL) permet l’analyse de faibles volumes d’échantillons plasmatiques (100 à 250 µL). Les profils stéroidomiques ont été précisés pour différents blocs enzymatiques. Des normes ont été établies dans le sang de cordon en fonction de l’âge gestationnel, montrant une immaturité de la voie de synthèse chez le grand prématuré.

La LC-MS/MS se positionne comme le gold-standard de l’investigation endocrinienne. Elle est applicable au dosage des stéroïdes non seulement plasmatiques mais aussi urinaires, permettant une exploration pédiatrique non-invasive. Enfin, en recherche fondamentale, elle constituera un outil précieux à l’exploration de modèles cellulaires ou animaux.

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