Dosage des stéroïdes par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem avec préparation automatisée de l’échantillon
F. Fraissinet*a (Dr), T. Pereirab (M.), F. Zieglerc (Dr), V. Brunela (Dr)
a Service de Biochimie Générale, CHU de Rouen, Rouen, FRANCE ; b Service de Pharmacologie, CHU de Rouen, Rouen, FRANCE ; c Service de Biochimie Générale, CHU de Rouen ; INSERM U1073, Université de Rouen, Rouen, FRANCE
* francois.fraissinet@chu-rouen.fr
Objectif : La spectrométrie de masse (LC-MS/MS) est la méthode de référence pour l’analyse des stéroïdes sériques. Elle nécessite une préparation manuelle et une extraction liquide-liquide ou sur phase solide. L’objectif du travail est de valider une méthode de dosage de testostérone, delta-4 androstènedione, 17-OH-progestérone, 11-désoxycortisol et DHEA avec une préparation automatisée de l’échantillon.
Matériel et méthodes : Le système analytique comprend le spectromètre de masse LCMS 8060 (Shimadzu) et une chaîne HPLC Nexera X2 couplée au préparateur d’échantillons CLAM-2030. Le dosage nécessite 30 µL de sérum. La séparation chromatographique est réalisée sur une colonne type Biphényl. La méthode a été validée par les critères suivants : précision, linéarité, dilution, spécificité, stabilité, effet matrice, comparaison de méthodes avec la RIA.
Résultats : Les temps de préparation et d’analyse varient de 6 à 13 min avec des temps de rétention de 5 à 7 min. Les CV de répétabilité et de reproductibilité ne dépassent pas 8,4 % et 6,3 %. Une bonne concordance avec la RIA est observée pour la testostérone chez l’homme et la 17-OHP, il existe un biais moyen de -20 % pour la testostérone chez la femme et l’enfant et de - 31 % pour la delta-4 androstènedione.
Discussion : La préparation automatisée montre des performances analytiques similaires aux études précédentes [1,2]. Elle permet de réduire le volume de sérum nécessaire et un gain de temps pour le rendu du résultat.
Références :
[1] Fiet et al. J Endoc Soc, 2016
[2] Travers et al. J Steroid Biochem Mol Biol, 2017
L’auteur n’a pas transmis de déclaration de conflit d’intérêt.