Résumé
Régulation du gène de la LPL par les miRNA : interaction du miR-29 avec des polymorphismes de la région 3’UTR étroitement associés à la triglycéridémie
Dr C. CAUSSYa, Dr S. CHARRIÈREa, Dr M. DI FILIPPOb, M. E. LEFAIc, Mme V. EUTHINEd, Mme M. DELAYe, Mme S. ROMEd, Pr P. MOULINa, M. C. MARÇAISf
a Fédération d’Endocrinologie,Hospices Civils de Lyon, Laboratoire CarMeN (Inserm U1060-INRA 1362, INSA), Université de Lyon, Lyon ; b Service de Biochimie,GHE,Hospices Civils de Lyon, Laboratoire CarMeN (Inserm U1060-INRA 1362, INSA), Université de Lyon, Lyon ; c Laboratoire CarMeN (Inserm U1060-INRA 1362, INSA), Université de Lyon, Lyon ; d Laboratoire CarMeN (Inserm U1060-INRA 1362, INSA), Université de Lyon 1, Lyon ; e Service de Biochimie et Biologie Moléculaire Centre de Biologie Sud CHLS, Hospices Civils de Lyon,, LYON ; f Service de Biochimie et Biologie Moléculaire Centre de Biologie Sud CHLS, Hospices Civils de Lyon, Laboratoire CarMeN (Inserm U1060-INRA 1362, INSA), Université de Lyon, Pierre Bénite
Objectif : Etudier les polymorphismes en 3’UTR du gène de la LPL associés à la triglycéridémie et déterminer leurs implications dans la régulation de l’expression du gène LPL par la modification de sites de liaison de miRNA.
Matériels : Génotypage de patients diabétiques de type 2, avec phénotype lipidique documenté, pour identifier les polymorphismes associés à la triglycéridémie. Estimation des haplotypes par le logiciel PHASE. Etude bio-informatique des modifications d’interaction miRNA-LPL induites par ces polymorphismes. Validation des interactions LPL-miRNA par co-transfection dans la lignée cellulaire HEK293T de la séquence 3’UTR de la LPL couplée à un gène rapporteur luciférase avec le précurseur des miR-candidats ou un miR-contrôle. L’expression de la LPL a été évaluée en mesurant l’activité luciférase.
Résultats : Le génotypage de 278 sujets a identifié un haplotype spécifique composé de huit polymorphismes significativement associés à une diminution des triglycérides. Cet haplotype est présent exclusivement chez les sujets normotriglycéridémiques (fréquence allélique 7.9%). In silico, cinq polymorphismes sont susceptibles de supprimer des sites de liaison de miR-29. In vitro, on observe une diminution significative (-25+/-6%, p<0.001) de l’activité luciférase de l’haplotype sauvage en présence de miR-29 comparée au miR-contrôle, non observée avec l’haplotype muté.
Discussion : Nous avons identifié huit polymorphismes appartenant à un haplotype de la LPL significativement associé à une diminution de la triglycéridémie. Cet haplotype supprime le site de liaison de miR-29 in vitro. La levée d’inhibition ainsi induite, pourrait augmenter l’expression de la LPL et expliquer la diminution de la triglycéridémie chez les porteurs de l'haplotype.
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